高压制备色谱是以分离出纯物质为目的的色谱系统,分析色谱是以分析出样品组分信息为目的的色谱系统,基于他们目的的不同,制备色谱相对于分析色谱有很多不同特征,不能简单等同。常用的色谱模式有低压,中压,高压三种,以应对不同类型和不同纯度要求的样品的分离,同时尽可能减少成本。
高压制备色谱系统部件:接口。接口可用于不同尺寸的螺母。例如,10 - 32 用于锥形螺母,1/4-28 用于平底螺母。接口可以是平底的,用于契合卡套的平底。这些类型的接口适用于中压制备色谱。接口也可以是锥形的,用于契合卡套。锥形端口适用于高压制备色谱。在使用以上这三个色谱系统部件时,我们还需要注意这些事项才能保证使用状态:
1.在安装到任何色谱系统之前,确保所有的管线都有一个笔直的切口,边缘没有任何残留物;
2.始终使用适当的工具来切割管线;
3.滚花头的螺母或配件只能用手拧紧;
4.过度拧紧螺母或接头通常会减少管线的内径,导致压力升高和流速错误;
5.六角接头通常与不锈钢管一起使用,初次安装时必须用手拧紧,以免损坏螺纹。用手拧紧后必须用合适的扳手再次紧固(通常为1/4圈)。
高压制备色谱使用时,当色谱柱直径较大时,柱头往往设计成锥形或有类似于伞状的液流导向结构,使得当大量样品进入到柱头上时,能迅速地分散到整个柱横截面上,及时被流动相冲走,避免了因样品的局部过浓而引起柱超负荷和谱带加宽。柱子填料则采用比较耐压的交联改性的多糖凝胶(如Sepharose CL,Superose等),聚合物微球,复合材料介质或硬质SiO2基质的化学键合相等,粒径一般在25~40μm。