【ISCO 制备色谱仪】快速色谱法在简单碳水化合物纯化中的应用

02 背景

二甲基亚砜（DMSO）常用于反相色谱的样品溶解，因为它能溶解大多数化合物。DMSO能够溶解碳水化合物，但在HILIC中是一种弱溶剂，因此它允许样品吸附在柱子上。在使用氨基柱时，DMSO在洗脱早期被洗脱；然而，在采用非氨基介质的其他HILIC运行中，它可能在梯度洗脱的后期才被洗脱。

03 结果与讨论

虽然亲水相互作用液相色谱（HILIC）属于正相色谱，但它使用的溶剂通常适用于反相色谱，因此需要根据表1中的设置调整蒸发光散射检测器（ELSD）的参数，以保持基线稳定的同时维持灵敏度。

表1. 纯化碳水化合物的蒸发光散射检测器（ELSD）设置。

第一个实例使用了核糖和葡萄糖。亻贞查梯度和聚焦梯度都使用乙腈作为弱溶剂。亻贞查运行只用了少量几毫克，并且为了提高这个小样品负载的灵敏度，ELSD增益被调高到3。第二个洗脱峰用于聚焦梯度；计算梯度后，ELSD增益被重置为1以保持ELSD响应在量程内。本案例使用50克的RediSep Gold氨基管柱分离100毫克混和物。

果糖和蔗糖通常一起出现在样品中。图2展示了从杂质中纯化果糖的过程。该混合物以与核糖-葡萄糖样品类似的方式运行，但改採行梯度聚焦于葡萄糖。在约1.8柱体积（CV）出现的峰是用于溶解样品的DMSO。

图1. 核糖和葡萄糖在 5.5 克 RediSep Gold Amine 柱上运行亻贞查方法（上图），并聚焦到 50 克 RediSep Gold 胺柱上。样品总负载量为核糖和葡萄糖各 50 毫克。聚焦梯度中约 1.8 柱体积处的小峰是 DMSO。

图2. 使用 RediSep Gold Amine 柱和乙腈/水梯度从蔗糖中纯化不纯的果糖。

04 丙酮作为弱溶剂

丙酮也是HILIC的弱溶剂，可以替代乙腈使用。尽管醇类可以用于HILIC，但这些溶剂对于在胺柱上纯化碳水化合物来说太强了。使用丙酮纯化了一个果糖和葡萄糖的样品。

该混合物的纯化方式与之前的例子相似，除了运行亻贞查梯度时使用了一根15.5克的RediSep Gold Amine柱，因为PeakTrak允许使用任何尺寸的Teledyne ISCO柱进行亻贞查运行。聚焦梯度使用了一根50克的RediSep Gold Amine柱，但计算出的梯度需要较低的水浓度来纯化葡萄糖，这表明对于这些化合物，丙酮是比乙腈更强的溶剂。

图3. 使用丙酮/水梯度纯化的果糖和蔗糖。亻贞查运行使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold 胺柱。

05 结论