使用SPEX组织研磨仪鉴定中药材“银柴胡”

“银柴胡”是中医药中清肺的常用中药材。银柴胡的功效是清虚热、除疳热，银柴胡的作用是治阴虚发热、骨蒸劳热、小儿疳积发热，银柴胡用药禁忌是外感风寒及血虚。（具体用药，请遵照医生遗嘱，使用专业医师开具的药方）

银柴胡 《本草求原》：清肺、胃、脾、肾热，兼能凉血。 《纲目拾遗》：谓热在骨髓，非银柴胡莫疗，用以治虚劳肌热骨蒸，劳疟热从髓出及小儿五疳赢热，盖退热而不苦泄，理阴而不升腾，固虚热之良药。

银柴胡作为在临床及中成药生产中应用广泛的中药材, 部分混伪品流入市场, 直接影响着相关中药的质量及临床用药安全。由于受鉴定人员经验、种质资源、药材采收时期等因素影响, 利用传统生药鉴定的方法已经难以满足银柴胡真伪鉴定的需求。

中文核心期刊《药学学报》2019年05期中，一篇来自宁夏中药材开发与利用工程技术研究中心李军等人：“中药材银柴胡及其混伪品的DNA条形码鉴定研究”的文中，选取4种候选条形码序列ITS、psbA-trnH、rbcL 和matK, 以PCR扩增和测序成功率、遗传距离、变异率、Barcoding gap 及进化树等为指标, 分析其对银柴胡及其混伪品的鉴别情况。

文中使用筛选合适的DNA条形码序列,以建立基于DNA条形码技术的银柴胡及其混伪品鉴定方法。该研究团队共收集了60份银柴胡及其混伪品，进行DNA提取：取经鉴定的银柴胡及其混伪品基原植物样品30 mg, 干燥药材去除表皮取中间部分50 mg,加入GP1 缓冲液和钢珠2 枚,经高通量组织研磨机（美国SPEX公司 Geno 2010）研磨4 或6 min 后, 采用DNA 提取试剂盒提取总DNA,详细操作参照试剂盒说明书。

SPEX 高通量组织研磨仪，可一批次处理6块深孔板，共576个样品，可进行干磨、湿磨、低温研磨，可快速粉碎样品，并保障样品完整性，对研磨中药材非常有效，是中药材研究的利器。

而后对4种DNA条形码序列ITS、psb A-trn H、rbc L和mat K进行PCR扩增和测序,计算各序列PCR扩增和测序成功率;利用MEGA7.0分析序列特征、计算遗传距离,并构建Neighbour-joining (NJ)系统进化树;利用种间种内变异分析做Barcoding gap图;运用BLAST方法计算各序列鉴定成功率,通过以上指标综合评价不同序列的鉴别能力。

结果显示, ITS序列的PCR扩增及测序成功率zui高,为95.2%, matK低,为75%; 4种序列的长度范围为211～797 bp, ITS的GC含量在各序列中zui高,为54.35%; matK和ITS的鉴定成功率较高,分别为92%和90%; Barcoding gap图显示ITS有明显的间隔区, rbc L、mat K和psb A-trn H序列间隔区不明显或种间种内变异有部分重叠; NJ系统进化树显示, ITS可将银柴胡聚为一支,同属混伪品二柱繁缕与银柴胡明显分为不同支, rbc L和mat K不能把混伪品二柱繁缕分开。因此, ITS序列可作为银柴胡及其混伪品鉴定的优选条形码序列,为银柴胡的真伪鉴定提供科学依据。